移液器的检测和校准

（一）气密性检测

移液器吸满液体后，手持垂直放置15s，检查吸嘴的尖头有无液滴，如有，则说明漏气。

（二）准确性检测

1）量程小于1μl，建议使用分光光度法检测。将移液器调至目标体积，然后移取染料溶液，加入一定体积的蒸馏水中，测定溶液的稀释度（334nm或340nm），重复几次移液操作，计算移液器的度。

2）量程大于1μl，可以用称重法检测。通过对水的称重，转换成体积（体积=质量/密度），鉴别移液器的准确性。由于水的密度是随着温度变化而变化，且称量天平本身度不符合检测要求，检测又大多在一个开放式空间内操作，偏差在所难免。因而，此种称量法只能现场粗略地判断移液器的准确性，进一步的校准必须在专业的实验室操作进行。

注意：称重法实验室*条件是高度灵敏的分析天平（定期校准）、双蒸水和称量容器。水、移液器和吸嘴必须具有相同的温度（20℃时水的密度为0.09982）。

二、专业校准

移液器的工作量大，长期使用，将会使弹簧弹力发生变形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就会产生误差。为了保证移液器传递液体量的准确性，必须对移液器进行定期校准。为了更好地发挥该类计量仪器的作用，对新购进的仪器要进行校准才能使用；对正在使用的计量仪器，由于长期使用会造成其示值于度量对象的误差，这种误差若不进行控制，及时校正，必定会影响科研工作。因此，对使用的移液器要定期检定、校正，并建立档案，只有这样才能使其在日常工作中更好的发挥作用。

目前，在许多实验室条件下进行的常规检测并不能*取代专业的校准工作，因为校准对于外部环境、工作条件及使用的精密仪器具有较高的技术要求，而这些条件往往是大多数实验室无法提供的。现在一些大型的移液器制造商均采用统一的移液器标准操作规范，利用专业软件校正系统，通过计算机对分析天平进行在线控制，测量、数据采集、计算、结果评价等环节由软件控制完成，所有人为操作都被计算机记录随报告打印出来，采用电脑对数据进行评估认证，*排除了人为操纵校准结果的可能性，并制定当地代理商提供专业的校准和维修服务。下面以Eppendorf公司为例，介绍其专业校准操作。

（一）校准的基本操作条件

操作室：独立房间，显示温度和湿度状态。

温度控制：15~30℃（±0.5℃）

湿度控制：60%~90%

工作台面：防震、防尘、远离热源、无阳光直射。

天平：0.000 01g精密分析天平（小数点后5位），每年需由厂家进行校准。

防蒸发装置：Eppendorf提供的湿度阱，防止称量液体的挥发。

测试介质：双蒸水，每4h更换一次，批次更换周期不大于2周。

（二）操作过程

1）同温化处理：校正前，所有移液器及校正介质（如工作台、天平、双蒸水等）置于相同操作间至少4h，以确保它们具有相同的温度。

2）内外部清洗。

3）润滑活塞。

4）校准：采用三点校准法，即根据移液器量程范围，选取zui低量程、中间值和zui高量程三点分别测试10次，各个测试点取其平均值，计算其准确度（inaccuracy）和度（imprecision），评价标准符合DIN 12650要求。

5）  校准报告：可根据客户需求提供给算计打印的标准报告或PICASO校正报告，符合ISO、DIN或ASTM相关标准。

三、影响准确性的因素

1）操作错误：包括30℃手持式移液器吸液；与吸嘴不匹配，较易造成脱落；残留的试剂倒流，污染活塞和密封圈；快速吸液排液，导致部分液体残留在吸头上等都会影响准确性。

2）移液器损坏：包括移液器的头部被刮擦，断裂受损；活塞受污染；弹簧受腐蚀等。

3）操作条件的影响：包括未作调整吸取与水不同密度的液体；样品和移液器的差别太大等。